[题]白细胞计数：白细胞计数的方法学评价?白细胞计数时标本采集的质量保证?如何减少白细胞计数的固有误差?如何校正有核红细胞对白细胞计数的影响?显微镜计数法白细胞计数的质量考核与评价的方法有哪些?白细胞分类计数的方法学评价?分享
白细胞计数
白细胞计数(WBC)是指测定单位容积的外周血各种白细胞的总数。
白细胞计数方法有显微镜计数法和血液分析仪法
WBC显微镜计数法:
白细胞稀释液(2%冰醋酸)0.38ml加血20μl,充分混匀后充入计数池，然后静置2~3min,在低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞的总数，最后计算每升血液中白细胞计数值。
(2%冰醋酸配置：98ml蒸馏水加2ml浓的冰醋酸)
假如N为4个大方格内白细胞总数。
计算公式：
WBC=((N／4)／0.1ul) X 20（稀释倍数）
=(N/4)X10^7X20/L
=(N／20)X10^9/L
N/4为平均每个大方格中白细胞数；0.1ul为一个大方格的体积；20 为稀释倍数：0.38ml白细胞稀释液加20μl血
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方法 |
优点 | 缺点 | 适用范围 |
| 显微镜计数法 | 白细胞计数参考方法，设备简单、费用低廉、简便易行。在严格规范条件下，可用于校准血液分析仪、血液分析仪计数结果异常的复核 |
费时，受微量吸管和计数板的质量、细胞分布状态以及操作者技术水平等因素影响，精密度和准确度相对较低
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适用于日标本量甚少的基层医疗单位和分散检测 |
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血液分析仪法 |
标本用量少、操作便捷，计数细胞数量多，易于标准化;经校准后，在严格规范条件下，精密度和准确性高
|
仪器昂贵，某些分析前人为或病理因素( 如抗凝不充分、外周血出现有核红细胞、巨大血小板、血小板凝集等)可干扰计数 |
适用于大规模健康人群普查，是目前临床上常规采用的筛检方法 |
(1)计数原则:计数压线细胞时，应遵循数上不数下、数左不数右的原则。
(2)计数室内细胞分布要均匀:白细胞总数在正常范围内时，各大方格间的细胞数不得相差8个以上。2次重复计数误差不超过10%，否则应重新充池计数。
白细胞计数的固有误差
固有误差:主要是指计数域误差。计数域误差是由于每次充池后血细胞在计数室内分布不可能完全相同所造成的误差，属于偶然误差。根据统计学原理，血细胞在计数室内的随机分布符合泊松(Poison) 分布，其标准差s=√m (m 为白细胞多次计数的均值)。
计数域误差变异系数(CV)可随计数的细胞数量增多而减小。因此，可通过增加计数室计数面积或计数更多的细胞来减少计数域误差。
固有误差还应包括计数室和吸管的使用次数，即计数池误差和吸管误差。
校正有核红细胞对白细胞计数
有核红细胞影响:由于白细胞稀释液不能破坏有核红细胞，若外周血出现有核红细胞，可使白细胞计数结果偏高。因此，白细胞计数结果必须加以校正(有核红细胞是分类100个白细胞时所见到的有核红细胞)
质量考核与评价
(1)经验控制:将白细胞计数结果与血涂片上白细胞分布密度相对照，通过观察二者是否相符，以粗略判断白细胞计数结果的准确性。由于血涂片的制备难以标准化。所以，当白细胞计数结果有矛盾时应复查。
白细胞总数与血涂片上白细胞分布密度的关系
| 白细胞总数X10^9/L |
每高倍视野平均白细胞数 |
|
4-7 |
2-4 |
|
7-9 |
4-6 |
|
10-12 |
6-10 |
|
13-18 |
10-12 |
(2)两差比值评价法:随机抽取1份标本重复计数，该份标本在短时间内2次计数细胞数之差与2次计数细胞数之和的标准差平方根之比，即为两差比值。本法适用于个人技术考核;也可用于复查与评价结果的准确性及治疗效果。
公式中，r:两差比值;x1,x2分别为前后2次数得的细胞数。
质量得分=100-(rX20.1)
(根据统计学理论，两差比值>1.99,则2次结果有显著性差异，故失分系数为(100- 60)/1. 99= 20.1)
| 质量得分 | 质量等级 | 意义 |
|
90-100 |
A |
优 |
|
80-89 |
B |
良 |
| 70-79 | C | 中 |
| 60-69 | D |
及格 |
| <60 | E | 不及格 |
(3)双份计数标准差评价法:采用多个标本，每个标本均作双份计数，用每个标本的双份计数之差计算标准差，然后求得变异系数及质量得分。本法适用于个人技术考核及室间质控。
白细胞计数参考值
成人: (4~10)X10^9/L
儿童: (15~20)X10^9/L
6个月~2岁:(11~12)X10^9/L
新生儿: (5~12)X10^9/L
白细胞总数高于 10X 10^9/L称为白细胞增多
低于4X 10^/L称为白细胞减少
通常将其减低的临界值定为(4~2.5)X10^9/L，低于2.5X10^9/L肯定异常。
白细胞分类计数DLC
白细胞分类计数的方法有显微镜分类计数法和血液分析仪法。
显微镜分类计数法的原理:将血液制成血涂片，经瑞氏染色后，在油镜下，根据白细胞形态特点逐个分类计数(一般计数100~200个白细胞)，并观察其形态的变化，然后求得各种白细胞的比值(百分率)。根据白细胞计数的结果，求得每升血液中各种白细胞的绝对值(绝对值=白细胞计数值X该种白细胞分类计数的百分率)。
白细胞总数与分类白细胞数量的关系
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白细胞总数（X10^9） |
应分类白细胞数（个） |
|
3-15 |
100（1张血涂片） |
| >15 | 200（1张血涂片） |
|
<3 |
50-100（2张血涂片） |
注意事项:
(1)观察全片:首先应采用低倍镜观察血涂片的染色质量及细胞分布情况，注意血涂片边缘及尾部有无巨大的异常细胞及寄生虫等，若发现异常应报告。
(2)计数异常和幼稚血细胞:
①分类计数中若发现异常或幼稚白细胞，应逐个分类计数和报告，并包括在白细胞分类的比值或百分率中。
②分类计数中见到幼稚红细胞，应逐个计数，但不计入100个白细胞内，而以分类100个白细胞时见到幼稚红细胞的数量来报告(x : 100)，并注明其所属阶段。
(3)观察其他血细胞或成分:应注意观察成熟红细胞和血小板的形态、染色及其分布情况。
成人白细胞分类计数参考值
|
细胞 |
比值 |
百分率% |
绝对值X10^9 |
| 中性杆状核粒细胞(Nst) |
0.01~0.05 |
1~5 |
0.04~0.50 |
|
中性分叶核粒细胞(Nsg) |
0.50~0.70 |
50~70 |
2.00~7.00 |
|
嗜酸性粒细胞(E) |
0.005~0.050 |
0.5~5 |
0.05~0. 50 |
| 嗜碱性粒细胞(B) |
0~0.01 |
0-1 |
0~0.10 |
|
淋巴细胞(L) |
0.20~0.40 |
20-40 |
0.80~4.00 |
|
单核细胞(M) |
0.03~0.08 |
3~8 |
0.12~0.80 |
白细胞总数与中性粒细胞数量增多及减少的参考标准
|
疾病 |
参考标准 |
| 白细胞增多 |
外周血白细胞>10X 10^9/L |
|
白细胞减少 |
外周血白细胞<4.0X10^9 /L |
|
中性粒细胞增多 |
外周血中性粒细胞绝对值>7. 0X10^9/L |
|
粒细胞减少 |
外周血中性粒细胞绝对值:成人<2.0X10^9/L;儿童<1.5X10^9/L |
|
粒细胞缺乏 |
外周血白细胞<2.0X10^9/L，中性粒细胞绝对值<0.5X10^9 /L或消失 |
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