改良牛鲍计数板的结构及血细胞直接计数分享
改良牛鲍计数板的结构
血细胞计数板(改良牛鲍计数板)用优质厚玻璃制成。每块计数板由“H”形凹槽分为2 个同样的计数池。计数池两侧各有一条支持柱，将特制的专用盖玻片覆盖其上，形成高0.10mm的计数池。
计数池内划有长、宽各3.0mm的方格，分为9 个大格。
每个大格面积为1.0mm^2,容积为0.1mm^3(ul)。
每个大格面积为容积为0.1ul(0.1X10^-6L)。
每个大格面积为容积为0.1ul(0.1X10^-6L)。
每个大格面积为容积为0.1ul(0.1X10^-6L)。
其中：
中央大方格用双线分成25 个中方格，位于正中及四角的5 个中方格是红细胞和血小板计数区域，每个中方格用单线分为16个小方格。
四角的4 个大方格是白细胞计数区域，用单线划分为16 个中方格。
根据1941年国际标准局(NBS) 规定，大方格每边长度允许误差为土1%，即1土0.01mm,盖玻片与计数池间隙深度允许误差为土2%，即0.1士0.002mm。
WBC计数区域：四角的4 个大方格（蓝色区域）
红细胞RBC和血小板PLT计数区域：正中及四角的5个中方格（红色区域,总面积占一个大方格面积的1/5）
压线细胞：数左不数右，数上不数下
红细胞RBC计数
在2ml红细胞稀释液（Hayem液）中加血10ul, 混匀后，充人计数池，静置3~5分钟后，在高倍镜下，计数中央大方格内4角和正中5个中方格内的红细胞数。
假如N为5个中方格内红细胞总数。
计算公式：
RBC=(((N/5)X25)/0.1ul) X 稀释倍数200/L
RBC=(((N/5)X25)) X 10X10^6X稀释倍数200/L
RBC=(N/100)X10^12/L
红细胞稀释液:
Hayem液由NaCl (调节渗透压)、Na2SO4 (提高比密防止细胞粘连)、HgCl2(防腐)和蒸馏水组成。
枸橼酸钠稀释液由枸橼酸钠(抗凝和维持渗透压)、甲醛(防腐和固定红细胞)、氯化钠(调节渗透压)和蒸馏水组成。
普通生理盐水或加1%甲醛生理盐水。
白细胞WBC计数
WBC显微镜计数法:
白细胞稀释液(2%冰醋酸)0.38ml加血20μl,充分混匀后充入计数池，然后静置2~3min,在低倍镜下计数四角4个大方格内白细胞的总数，最后计算每升血液中白细胞计数值。
(2%冰醋酸配置：98ml蒸馏水加2ml浓的冰醋酸)
假如N为4个大方格内白细胞总数。
计算公式：
WBC=((N／4)／0.1ul) X 20（稀释倍数）
=(N/4)X10^7X20/L
=(N／20)X10^9/L
N/4为平均每个大方格中白细胞数；0.1ul为一个大方格的体积；20 为稀释倍数：0.38ml白细胞稀释液加20μl血
血小板PLT计数
操作：
1.吸取稀释液:准确吸取10g/L草酸铵稀释液0.38ml,置于清洁小试管中。
2.采血:常规消毒无名指,穿刺后,让血液自然流出,准确采血20ul,置于含有草酸铵的稀释液中,立即充分混匀。
3.稀释静置:待完全溶血后再混匀1min,置室温10min
4.充液静置:取混匀的血小板悬液1滴充人血细胞计数板内,静置10~15min,使血小板充分下沉。空气干燥的季节应将血细胞计数板置湿盒内。
5.计数:用高倍镜计数血细胞计数板中央大方格内的四角和中央共5个中方格内血小板数量。
(PLT和RBC的计数区域相同)
假如N为5个中方格内血小板PLT总数
计算公式:
PLT=(((N/5)X25)/0.1ul) X 稀释倍数20/L
PLT=(((N/5)X25)X10X10^6) X 稀释倍数20/L
PLT=NX10^9/L
血小板稀释液：
根据血小板计数稀释液是否破坏红细胞分为破坏或不破坏红细胞2种计数法，在普通光学显微镜下区分血小板和小红细胞、真菌孢子及其他杂质形态。
A、草酸铵稀释液，破坏红细胞能力强，血小板形态清晰易辨，为首选稀释液法
B、复方尿素稀释液使血小板胀大后易辨认，但尿素易分解，不能完全破坏红细胞;
C、高铁氰化钾稀释液不能完全破坏红细胞;
D、复方碘稀释液不破坏红细胞，试剂又易长菌，已淘汰。
嗜酸性粒细胞计数
操作：
1.加稀释液：吸取嗜酸性粒细胞稀释液（如伊红-丙酮）0.38ml于小试管中。
2.采血：用微量吸管采血20μl,擦去管尖外部余血。将吸管插人小试管稀释液的底部,轻轻放出血液,并吸取上层稀释液清洗吸管2~3次。
3.混匀：将试管中的血液与稀释液混勾,待红细胞完全溶解。
4.充池：再次将小试管中的细胞悬液混匀。用滴棒蘸取细胞悬液1滴,充入改良牛鲍计数板的2个计数池中,室温下静置3~5min。
5.计数：低倍镜下计数2个计数池共计10个大方格内的嗜酸性粒细胞数量。
假如N为10个大方格内嗜酸性粒细胞总数
计算公式:
嗜酸性粒细胞=((N/10)/0.1ul) X 稀释倍数20/L
=((N/10)X10X10^6X20/L
嗜酸性粒细胞稀释液有伊红-丙酮稀释液、乙醇-伊红稀释液、溴甲酚紫稀释液和固绿稀释液等多种。分为：嗜酸性粒细胞保护剂（如乙醇、丙酮、乙二醇）、嗜酸性粒细胞着色剂（如溴甲酚紫、伊红、固绿等）、破坏其他细胞和增强嗜酸性粒细胞着色物质（如碳酸钾、草酸铵）、抗凝剂（如枸橼酸钠、EDTA）、防止乙醇和液体挥发剂（如甘油）。